寡核苷酸，单链、双链dna，以及rna可以定量溶于缓冲液，构成核酸的嘌呤碱和嘧啶碱具有共轭双键，使核苷核和核酸在紫外线光具有特征性的吸收光谱，最大吸收峰为260nm。窄光带紫外分光光度计，长260nm．，比色杯光径1cm，1个吸光度值（1a）相当于50ug/ml双螺dna，40ug/ml单螺旋dna或rna），20 ug/ml寡核苷酸。
测试前，选择正确的程序，输入原液和稀释液的体积，尔后测试空白液和样品液。然而，实验并非一帆风顺。读数不稳定可能是实验者最头痛的问题。灵敏度越高的仪器，表现出的吸光值漂移越大。
原理紫外分光光度法基于dna链上碱基的苯环结构在紫光区具有较强吸收，dna/rna在260nm处有最大的吸收峰，蛋白质在28onm处有最大的吸收峰，盐和小分子则集中在230nm处。因此，可以用260nm波长进行分光测定核酸浓度，od值为1相当于大约50ug/ml双链 dna，单链dna浓度约为33ug l ml，rna约为40ug/ml，寡核苷酸约为35ug/ml。如用1cm光径，用 h,o稀释dna/rna样品n倍并以h,o为空白对照，根据此时读出的od260值即可计算出样品稀释前的浓度:
dna (mg/ml ) =50×od260 读数×稀释倍数/1000rna (mg/ml) =40×od260读数×稀释倍数/1000。
a280nm是蛋白和酚类物质最高吸收峰的吸收波长，比值可进行核酸样品纯度评估:纯dna的a260/a280比值为1.8，纯rna为2.0。假如比值低，表示受到蛋白（芳香族)
或分类物质的污染，需要纯化样品。比值=1.5相当于50%蛋白质/dna溶液。
a230nm是碳水化合物最高吸收峰的吸收波长，比值可进行核酸样品纯度评估:纯dna和rna的a260/a230比值为2.5。若比值小于2.0标明样品被碳水化合物（糖类）、盐类或有机溶剂污染，需要纯化样品。
a320nm或a340nm为检测溶液样品的浊度，该值应该接近0.0。假如不足，标明溶液中有悬浮物，需要纯化样品。
仪器及试剂
超微量分光光度计
比色杯
样本dna
双蒸水
测定
1、将制备的dna悬浮溶解于te缓冲液中 ph8.0，10mmo1l的tris缓冲液，内含(1mmol/l edta)或悬浮溶解在灭菌水中(依据dna含量加水)。
2、用可扫描的紫外分光光度计测定制备的dna/rna的紫外吸收曲线，测定od260和od280，并计算比值:od260/od280，纯 dna的此比值约为1.8~2.0。纯rna的此比值
约为大于2.0。
3、根据每毫升1微克的纯dna的od260值=0.020，计算所得 dna的纯度:每毫升1微克的纯rna的od260值=0.025，计算所得rna的纯度。
注意事项
od值范围应该在0.1~0.99之间，否则不符合上述线性关系。
a260/a280比值可提供dna纯度的一个参考，但a260/a280比值会受ph影响。如果未调ph，比值可能与实际差别很大。如果需要准确数值，建议在10 mm tris cl，ph 8.5中检测，此时纯净的 dna a260/a280比值应为1.8-2.0（注意应使用同样缓冲液作为对照)
在测试时，离子浓度太高，也会导致读数漂移，因此建议使用ph值一定、离子浓度较低的缓冲液，如te，可大大稳定读数。样品的稀释浓度同样是不可忽视的因素：由于样品中不可避免存在一些细小的颗粒，尤其是核酸样品。这些小颗粒的存在干扰测试效果。为了最大程度减少颗粒对测试结果的影响，要求核酸吸光值至少大于0.1a，吸光值最好在0.1-1.5a。在此范围内，颗粒的干扰相对较小，结果稳定。从而意味着样品的浓度不能过低，或者过高（超过光度计的测试范围）。最后是操作因素，如混合要充分，否则吸光值太低，甚至出现负值；混合液不能存在气泡，空白液无悬浮物，否则读数漂移剧烈；必须使用相同的比色杯测试空白液和样品，否则浓度差异太大；换算系数和样品浓度单位选择一致；不能采用窗口磨损的比色杯；样品的体积必须达到比色杯要求的最小体积等多个操作事项。