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dna变性梯度凝胶电泳介绍及优点

[导读]变性梯度凝胶电泳(dgge)是一种根据dna片段的熔解性质而使之分离的凝胶系统。核酸的双螺旋结构在一定条件下可以解链,称之为变性。核酸50%发生变性时的温度称为熔解温度(tm)。tm值主要取决于dna分子中gc含量的多少。

变性梯度凝胶电泳(dgge)是一种根据dna片段的熔解性质而使之分离的凝胶系统。核酸的双螺旋结构在一定条件下可以解链,称之为变性。核酸50%发生变性时的温度称为熔解温度(tm)。tm值主要取决于dna分子中gc含量的多少。dgge将凝胶设置在双重变性条件下:温度50-60 ℃,变性剂0-100%。当一双链dna片段通过一变性剂浓度呈梯度增加的凝胶时,此片段迁移至某一点变性剂浓度恰好相当于此段dna的低熔点区的tm值,此区便开始熔解,而高熔点区仍为双链。这种局部解链的dna分子迁移率发生改变,达到分离的效果。tm的改变依赖于dna序列,即使一个碱基的替代就可引起tm值的升高和降低。因此,dgge可以检测dna分子中的任何一种单碱基的替代、移码突变以及少于10个碱基的缺失突变。 作为一种突变检测技术,dgge具有如下的优点:(1)突变检出率高。dgge的突变检出率为99%以上。(2)检测片段长度可达1kb,尤其适用于100-500bp的片段。(3)非同位素性。dgge不需同位素掺入,可避免同位素污染及对人体造成的伤害。(4)操作简便、快速。dgge一般在24小时内即可获得结果。(5)重复性好

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