目的探讨在旋转恒温箱中, 用氯化-235三苯基四氮唑 (ttc) 琥珀酸盐培养瓶进行快速细菌增菌培养, 以及孵育快速细菌鉴定生化试验管的实用性。方法比较105份模拟标本和52份临床标本, 在旋转恒温箱、bactec9120全自动血液培养仪、普通恒温培养箱中, 分别进行细菌培养时显示阳性所需要的时间;比较靛基质试验 (i) 、苯丙氨酸脱氨酶试验 (pd) 、尿素酶试验 (u) 、硝酸盐试验 (no3) 、七叶苷试验 (e) 在旋转恒温箱和普通培养箱中读取结果所需要时间和符合率。结果旋转恒温箱和bactec9120全自动血液培养仪比较, 阳性显示时间没有显著性差异 (χ2=3.17, p>0.05) , 和普通恒温培养箱比较, 阳性显示时间有显著性差异 (χ2=24.04, p<0.005) ;细菌生化鉴定管在旋转恒温箱和普通培养箱中所读取结果与常规法比较没有显著性差异 (χ2=0.75, p>0.05) , 所需时间有显著性差异。结论在旋转恒温箱中, 使用ttc琥珀酸盐培养瓶可以代替bactec9120全自动血培养仪进行快速细菌培养;细菌生化鉴定管在旋转恒温箱中培养14h即可获得可靠的鉴定结果。
随着人们对循证医学的日益重视和广泛使用, 临床迫切需要细菌的快速检验报告。而传统的细菌增菌培养需要18～48 h, 甚至更长, 生化鉴定也需要16～24 h才能判断结果。我们发现在恒温旋转培养箱中, 利用ttc琥珀酸盐血液培养瓶可以缩短细菌增菌培养时间, 同时, 在加大了底物浓度的生化鉴定管中加入高浓度的细菌生长物可以缩短细菌鉴定时间, 现报告如下。
标准菌株:大肠埃希菌 (atcc25922) 、金黄色葡萄球菌 (atcc25923) 、铜绿假单胞菌 (atcc27853) 、粪肠球菌 (atcc29212) , 已知菌株:全国和湖南省临床检验中心微生物室间质评下发的菌株及临床标本中分离鉴定后保存的菌株, 共105株。
模拟标本:由标准菌株和已知菌株制成;临床标本:为我院2003年6～8月间, 临床怀疑败血症患者的血液标本, 经bactec9120仪培养确定为阳性的细菌共52株。
bactec9120全自动血培养仪, thz-92b恒温旋转/振荡器, 恒温培养箱。
儿童血液培养增菌瓶由美国bd公司提供, 常规血液增菌培养瓶由杭州微生物试剂有限公司提供, ttc琥珀酸盐血液增菌培养瓶 (ttc瓶) 为实验室自制, 靛基质配成1.0 g/l的色氨酸, 苯丙氨酸脱氨酶配成5.0 g/l的
标准菌株和已知菌株经复苏传代后, 制成浓度为0.5 mcfarland的菌液, 菌液经梯度稀释后 (使含菌终浓度为10 cfu/ml) , 注入已加有5 ml正常人静脉血的儿童瓶、常规瓶和二瓶ttc瓶 (一瓶置旋转恒温箱, 一瓶置普通恒温箱) 中, 分别放入bactec9120系统、普通恒温培养箱和旋转培养箱中培养监测。生化试验用菌液配成10.mcfarland的浓菌悬液。
已接种模拟标本或临床标本的培养瓶分别放入旋转恒温箱、普通恒温培养箱和bactec9120系统中培养。当bactec9120系统报警, 或ttc瓶液体变红, 或常规瓶液体变混浊时, 记录培养时间。
快速法挑一满环上述浓菌液, 常规法用接种针挑适量菌落分别接种。快速法分别置恒温旋转箱、普通恒温培养箱, 常规法只置普通恒温培养箱培养, 温度均为36 ℃。
旋转培养快速法1～4 h, 普通培养快速法2～6 h, 常规法24 h后分别加入相应试剂, 靛基质、尿素酶 (不加试剂) 、硝酸盐变红色, 苯丙氨酸脱氨酶变绿色, 七叶苷变黑色记为阳性, 不变色记为阴性。
用χ2检验, 两者比较以p<0.05, 定为有显著差异。
2.1 105株已知菌株分别置旋转恒温培养箱、普通恒温培养箱和bactec9120全自动血培养仪中培养, 52株临床标本置旋转恒温培养箱和bactec9120全自动血培养仪中培养, 三种培养箱四种培养方法均没有假阴性结果, 但显示阳性的时间有差异, 见表1。将置旋转恒温培养箱中的ttc瓶和置bactec9120全自动血培养仪中的儿童瓶的阳性显示时间进行比较, 没有显著性差异 (χ2=3.17, p>0.05) , 将置旋转恒温培养箱中的ttc瓶和置普通恒温培养箱中的常规瓶的阳性显示时间进行比较, 有显著性差异 (χ2=74.92, p<0.005) , 再将置旋转恒温培养箱中的ttc瓶和置普通恒温培养箱中的ttc瓶的阳性显示时间进行比较, 有显著性差异 (χ2=21.47, p<0.005) , 将置普通恒温培养箱中的ttc瓶和常规瓶的阳性显示时间进行比较, 也有显著性差异 (χ2=24.04, p<0.005) 。